微生物实验室常用染色液配制方法

　化学检验员培训，化学检验，化学检验员资格证，广州化学检验员培训　⒑ 间苯三酚(phloroglucin)溶液 用于测定木质素。

　　配方：间苯三酚5g ; 95%酒精100ml

　　注：此溶液呈黄褐色即失效。

　　⒒ 橘红G(orange G)酒精溶液 为酸性染料，染细胞质，常作二重或三重染色用。

　　配方：橘红G 1g ; 95%酒精100ml

　　⒓ 番红(safranin O) 为碱性染料，适用于染木化、角化、栓化的细胞壁，对细胞核中染色质、染色体和花粉外壁等都可染成鲜艳的红色。并能与固绿、苯胺兰等作双重染色，与橘红G、结晶紫作三重染色。

　　配方：(1)番红水溶液 番红0.1或1 g ;蒸馏水100ml

　　(2)番红酒精溶液 番红0.5或1 g ;50%(或95%)酒精100ml

　　(3)苯胺番红酒精染色液

　　甲液 番红5 g +95%酒精50ml

　　乙液 苯胺油20ml +蒸馏水450ml

　　将甲、乙二溶液混合后充分摇均匀，过滤后使用。

　　⒔ 固绿(fast green) 又称快绿溶液。为酸性染料，能将细胞质，纤维素细胞壁染成鲜艳绿色，着色很快，故要很好的掌握着色时间。

　　配方：(1)固绿酒精液 固绿0.1 g ; 95%酒精100ml

　　(2)苯胺固绿酒精液 固绿 1 g ;无水酒精 100ml ;苯胺油 4ml

　　配后充分摇匀，过滤后使用。现配现用效果好。

　　⒕ 苏木精(hematoxylin)染液 苏木精是植物组织制片中应用最广的染料，是苏木科植物苏木的心材提取出来的。它是很强的细胞核染料，而且可以分化出不同颜色。配方很多，现举海登汉氏(Heidenhain's)苏木精染色液，又称铁矾苏木精染色液。

　　配方：甲液(媒染剂)： 硫酸铁铵(铁明矾)2-4g ;蒸馏水100ml

　　(必须保持新鲜，最好临用之前配制)

　　乙液(染色剂)：苏木精 0.5-1g ;95%酒精 10ml;蒸馏水 90ml

　　配制步骤：(1)将苏木精溶于酒精中，瓶口用双层纱布包扎，使其充分氧化(通常在室内放置两个月后方可使用)。(2)加入蒸馏水，塞紧瓶口，置冰箱中可长期保存。

　　切片需先经甲液媒染，并充分水洗后才能以乙液染色，染色后经水稍洗再用另一瓶甲液分色至适度。

　　铁矾苏木精染液为细胞学上染细胞核内染色质最好的染色剂，但要注意甲液与乙液在任何情况下决不能混合。

　　⒖亚甲基蓝染液 常用于细菌、活体细胞等的染色。

　　取0.1g亚甲基蓝，溶于100ml蒸馏水中即成。

　　⒗詹纳斯绿B(Janus green B)染液

　　将5.18gJanus 绿溶于100ml蒸馏水，配成饱和水溶液。用时需稀释。稀释的倍数应视材料不同而异。

　　⒘硫堇染液

　　取0.25克硫堇(也称劳氏青莲或劳氏紫)粉末，溶于100ml蒸馏水中，即可使用。使用此液时，需要用微碱性自来水封片或用1%NaHCO3水溶液封片，能成多色反应。

　　18.黑色素液

　　水溶性黑素10g，蒸馏水100mL，甲醛(福尔马林)0.5mL。可用作荚膜的背景染色。

　　19.墨汁染色液 国产绘图墨汁40mL，甘油2mL，液体石炭酸2mL。先将墨汁用多层纱布过滤，加甘油混匀后，水浴加热，再加石炭酸搅匀，冷却后备用。用作荚膜的背景染色。

　　20.吕氏(Loeffier)美蓝染色液

　　A液：美蓝(methylene blue,又名甲烯蓝)0.3g，95%乙醇30mL;

　　B液：0.01%KOH100mL。

　　混合A液和B液即成，用于细菌单染色，可长期保存。根据需要可配制成稀释美蓝液，按1∶10或1∶100稀释均可。

　　21.革兰氏染色液

　　(1)结晶紫(cristal violet)液：结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL，1%草酸铵水溶液80mL。将两液混匀置24h后过滤即成。此液不易保存，如有沉淀出现，需重新配制。

　　(2)芦戈(Lugol)氏碘液：碘1g，KI 2g，蒸馏水300mL。先将KI溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶解，再加蒸馏水至300mL，即成。配成后贮于棕色瓶内备用，如变为浅黄色 能使用。

　　(3)95%乙醇：用于脱色，脱色后可选用以下(4)或(5)的其中一项复染即可。

　　(4)稀释石炭酸复红溶液：碱性复红乙醇饱液(碱性复红1g，95%乙醇10mL，5%石炭酸90mL)10mL，加蒸馏水90mL。

　　(5)番红溶液：番红O(safranine O，又称沙黄O)2.5g，95%乙醇100mL，溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中，用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。

　　以上染色液配合使用，可区分出革兰氏染色阳性(G+ )或阴性(G- )细菌，前者蓝紫色，后者淡红色。

　　22.齐氏(Ziehl)石炭酸复红液：碱性复红0.3g溶于95%乙醇10mL中为A液;0.01%KOH溶液100mL为B液。混合A、B液即成。

　　23.姬姆萨(Giemsa)染液

　　(1)贮存液：称取姬姆萨粉0.5g，甘油33mL，甲醇33mL。先将姬姆萨粉研细，再逐滴加入甘油，继续研磨，最后加入甲醇，在56℃放置1-24h后即可使用。

　　(2)应用液(临用时配制)：取1mL贮存液加19mLpH7.4磷酸缓冲液即成。也可以贮存液∶甲醇=1∶4的比例配制成染色液。

　　24. 1%瑞氏(Wright's)染色液

　　称取瑞氏染色粉6g，放研钵内磨细，不断滴加甲醇(共600mL)并继续研磨使溶解。经过滤后染液须贮存一年以上才可使用，保存时间愈久，则染色色泽愈佳。

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